革兰氏染色(se)法（革兰氏染色法实验报告的图片）

器材和试剂

显微镜、接种环、酒(jiu)精灯、载玻片、吸管、菌(jun)种、培养基、革兰染色液、生理盐水等(deng)。

原理：

1.革兰阳性菌细胞壁结构较致(zhi)密，肽聚糖层厚，脂质含量少(shao)，乙醇不易透入；而革兰阴性(xing)菌细胞壁结构较疏松，肽聚糖(tang)层少，脂质含量多，乙醇易渗入。

2.革兰阳(yang)性菌的等电点低（pI2～3），革兰阴性菌等(deng)电点较高（pI4～5），在相同pH条件下，革兰(lan)阳性菌所带阴电(dian)荷比革兰阴性菌多(duo)，与带正电荷的结晶(jing)紫染料结合较牢固且不易脱(tuo)色。

3.革兰阳性菌细(xi)胞内含有大量核糖核酸镁盐，可(ke)与结晶紫和碘牢固地结合成大分子复(fu)合物，不易被乙醇脱(tuo)色；而革兰阴性菌细胞内(nei)含极少量的核糖核酸镁(mei)盐，吸附染料量少，形成的复合(he)物分子也较小，故易被乙醇脱色。

操作方法：

1．细菌涂片标本的(de)制作

（1）涂片：取洁净载玻片一张，用玻(bo)璃铅笔于玻片上划个直径1.5cm左右的圆圈。用接种环在圆圈内(nei)各加1环生理盐水。接种环灭菌后，挑取细菌(jun)少许在盐水中磨匀，呈(cheng)轻度混浊。涂好的菌膜大小一般以1cm2左右为宜。每次取菌前后(hou)注意将接种环灭菌。如果是液体(ti)培养物可直接涂(tu)抹于洁净的载玻片上。

（2）干燥：涂(tu)片最好在室温下自(zi)然干燥，或将标本面向上(shang)，置于酒精灯火焰高处慢慢烘干，切(qie)不可在火焰上烧干。

（3）固(gu)定：细菌的固定常(chang)用火焰加热法，即将上述已干的(de)涂片在酒精灯火焰中通过3次。固定的目的在于杀死细菌，并(bing)使菌体与玻片粘附牢固，染色(se)时不致于被染液和水冲掉，同时固(gu)定可凝固细胞质，改变细菌对染料的通透性。

2.细菌涂片标本(ben)的染色

（1）初染：将结晶(jing)紫染液加于制好的涂片上，染色 1min，用细流水冲洗，甩去(qu)积水。

（2）媒染：加(jia)卢戈碘液作用1min，用细流水冲(chong)洗，甩去积水。

（3）脱色：滴加95%酒精(jing)数滴，摇动玻片数秒钟，使(shi)均匀脱色，然后(hou)斜持玻片，再滴(di)加酒精，直到流下(xia)的酒精无色为止(zhi)（约0.5min），用细流水冲洗，甩去积水。

（4）复染：加稀释石炭酸复红染0.5min，用细流水冲洗，甩去积水。

待标本片自(zi)干或用吸水纸吸干(gan)后，在涂片上滴加香柏油，置油镜下(xia)观察。

结果判定：被染成紫色的细(xi)菌为革兰阳性菌；被染成红色的(de)细菌为革兰阴性菌。

影响因(yin)素：

1.操作因素：涂片太(tai)厚或太薄，固定时(shi)菌体过分受热，以及脱色时间长短(duan)，都会影响染色结果(guo)。

2.染液因素：所有染液应防止染液蒸(zheng)发而改变浓度，特别是卢戈碘(dian)液久存或受光作用后易(yi)失去媒染作用；涂片积(ji)水过多会改变染液浓度，影响染色效(xiao)果，如脱色用的乙醇(chun)以95%为宜，浓度降低会增强其(qi)脱色能力。

3.细菌因素：细菌的(de)菌龄不同，革兰染色结果也有差异(yi)，一般以18～24h的培养物染色(se)效果最好，菌龄过长影响细菌染色(se)性。

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