中文名：大分子量DNA提取试剂盒 (10)
品 牌：QIAGEN
货 号：12462
纯化至多50 μg BAC、PAC和P1 DNA或至多200 μg的柯斯质粒DNA和非基因组DNA
高效去除基因组DNA污染
转染级别纯度的高分子量DNA
快速简单的操作
QIAGEN Large-Construct Kit提供重力流和阴离子交换柱，用于纯化大分子量的DNA。独特的ATP-dependent外切酶消化步骤，确保特异性去除基因组DNA。产物DNA的纯度相当于经过两次CsCl密度梯度离心得到的纯度，适用于转染级别的应用。
特点 参数
应用 Subcloning, transfection, sequencing etc.
起始样本体积 <500 ml culture volume
质粒类型 BAC, PAC, P1, cosmid DNA
处理 Manual (centrifugation)
每次处理样本量；通量 1 sample per run
技术 Anion-exchange technology
每次运行时间或处理样本数 280 min
产量 <150 ug
性能
使用QIAGEN Large-Construct Kit纯化DNA，无基因组DNA的污染（参见Efficient removal of genomic DNA）。基因组DNA的去除确保准确可靠的进行DNA定量，使一些敏感实验可在明确的和可重复的条件下进行。
原理
QIAGEN Large-Construct Kit使用经优化的重力流操作，获得的DNA的纯度显著高于其他常规方法获得的DNA的纯度。独特的ATP-dependent外切酶消化步骤，确保特异性去除基因组DNA。
QIAGEN Large-Construct Kit含有的QIAGEN-tips中独特的阴离子交换树脂专为核酸纯化设计。其出色的核酸分离特性可纯化得到高纯度DNA，相当于经过两次氯化铯梯度离心得到的纯度。预装的QIAGEN-tips（参见Anion-exchange tips）运用重力沉降原理，减少了质粒制备过程所需的手工操作时间。整个QIAGEN质粒纯化系统不使用苯酚、氯仿、溴乙锭和氯化铯等有毒物质，最大程度减小了对使用者及环境的危害。
操作流程
使用碱裂解法裂解多达500 ml的培养液后（参见QIAGEN Plasmid Kit procedures），使用试剂盒中的ATP-dependent外切酶进行消化，确保特异性去除基因组DNA及缺损的高分子量DNA。之后将样本上样至阴离子交换柱，在适当的低盐浓度和pH值条件下，质粒DNA与树脂特异性结合。用中等盐浓度的缓冲液洗涤，去除RNA、蛋白质、代谢物和其他小分子的杂质。用高盐缓冲液洗脱已去除基因组DNA的纯化质粒DNA。加入异丙醇使DNA浓缩和脱盐，之后离心收集。
应用
QIAGEN Large-Construct Kit纯化获得的DNA适用于各种下游应用，包括：
亚克隆和鸟枪法制备DNA文库
对高分子量DNA直接进行测序
转染 |
