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国达黄曲霉免疫亲和专用小柱挥泪促销


国达黄曲霉免疫亲和专用小柱挥泪促销
产品型号: 国达
产品品牌: 国达
产品价格: 面议
所 在 地: 河南 郑州市
发布日期: 2016-01-27

详细说明

1、方法简介:
本方法是用免疫亲和柱净化,高效液相色谱荧光法检测黄曲霉毒素 B1,B2,
G1 , G2,M1和  M2,此法可适用于果仁及其类似物,干水果,谷物,调味品,
茶叶,咖啡,可可,及其他食品原料和饲料。
黄曲霉毒素易溶于极性的有机试剂,因此均匀基质中的黄曲霉利用甲醇/水
通过摇晃或分散提取而得,对于高脂肪/油含量的样品基质需加入正己烷予以脱
脂。然后过滤 PBS稀释。但对于饲料,调味品,茶叶,咖啡,可可等不用   PBS
而用吐温溶液稀释然后经玻璃纤维滤纸过滤,然后经 HPLC柱后光化学衍生荧光
检测器检测。
2、提取步骤
‹  仪器,所需试剂,溶剂
黄曲霉毒素免疫亲和柱系列:免疫亲和柱系列  (1ml,25支/盒;
3ml,15支/盒);高效液相装置:安捷伦  1200 系列 含泵,在线脱气机,自动进样器,荧光
检测器,柱温箱;光化学反应器:   Photochemical    Reactor 另带反应圈和 UV灯;
色谱柱: XB-C18    5μm, 250 x 4.6 mm;预柱: C18 4 x 2 mm;
均质机;水平振荡器;搅碎机;滤纸;漏斗;锥形瓶:100 ml;
食品中黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2,M1 和M2的检测
玻璃纤维过滤器;
SPE转接头及  50ml大容量上样器   SPE Adapter
10 ml一次性注射器;
分析天平(精度 0.02 g);
1.8 mL自动进样样品瓶;
移液枪;
SPE装置带抽真空系统:SPE  Device
黄曲霉毒素  B1, B2, G1, G2,M1,M2混标或需测单标;
吐温  20;
PBS 缓冲溶液:1.16 g  Na2HPO4/0.20 g  KH2PO4/ 8  g NaCl/0.2  g KCl  溶于
900ml水中,用  HCL或  NaOH调  PH至  7.4然后定容至   1000ml;
磷酸氢二钠;磷酸二氢钾;氯化钾;氯化钠;去离子水;甲醇,分析纯;甲醇,色谱纯;乙腈,色谱纯;正己烷,分析纯;
提取溶液:甲醇和水体积比  80/20,对于泥浆样纯甲醇(分析纯)作为提取
溶剂单独使用;
HPLC
洗脱液  A:水。
洗脱液  B:甲醇/乙腈    80/20 (v/v)。
吐温溶液 :100ml吐温  20 溶于 900ml水中
HPLC校正标准溶液:
由标准溶液配成目标物含量为 1ug/kg的校正溶液
‹  前处理步骤
—  花生果仁类似产品的提取(开心果,杏仁,杏仁壳,花生及其类似物):
称取 50g浆状样(均质时加入  100-300%水)加入 5gNaCl(对于加标样品加
入加标溶液),加入 75ml纯甲醇然后均质  3分钟或震荡提取  30分钟。对于量少
的样品,称 25g干燥的均匀样,加入  5g NaCl和  100ml甲醇/水   80/20 (v/v)  溶液
然后均质 3分钟或震荡  30分钟进行提取。将提取液用滤纸过滤或离心,上清液
转移于 100ml锥形瓶中。
对于特殊的花生酱或其他果仁酱,其外面有一层油脂,所以很难被提取。称
25g样品,加入  5g NaCl,100ml提取溶液和  50ml正己烷。用均质机提取  3-5分
钟,油脂部分会溶于正己烷相,过滤收集澄清液。
—  谷物牛奶类
称取 25g样于  250ml锥形瓶中,加入  5g NaCl,100ml提取溶液(对于加标
样品加入加标溶液),然后在水平震荡器上 150  rpm震荡  30分钟。对于奶粉样
品可称取 2-5g加提取液溶解,如难溶解可适当加热,滤纸过滤,收集澄清液。
—  调味品,茶,咖啡,可可,饲料,医药品,辣椒提取物
称取 20g干样,50g泥浆样,加入   5g NaCl,100ml提取溶液,浆状样加   80ml
纯甲醇(对于加标样品加入加标溶液),然后在水平震荡器上 150  rpm 震荡  30
分钟。滤纸过滤,收集澄清液。取 5ml滤液加入  20ml吐温溶液稀释,稀释液用
玻璃纤维过滤器过滤。
—  空白值
试剂空白值必须测定。
‹ 免疫亲和柱(IAC)净化
将免疫亲和柱置于固相萃取装置上,一个样品对应一根柱子;
10ml PBS溶液活化柱子,流速保持在  2 – 3 ml/min,确保上样前柱子保留少
量(0.5ml)的 PBS溶液,活化液不收集;
2、调味品,茶,咖啡,可可,饲料,医药品,辣椒提取物:9ml  稀释样品
通过免疫亲和柱,流速不超过 5 mL/min。用约 20ml去离子水淋洗柱子,其中   10ml
流速不得超过 5 mL/min,抽真空 1分钟;
用 1.5ml甲醇洗脱;
(将柱子接于玻璃装置上,用 0.75ml  甲醇两次将目标物洗脱下来并收集于
15ml 离心管中,起始在柱子上加压令其大概通过 4  滴液滴,然后利用重力让其
自然流下,最后通入空气令液体全部流出并收集。)
洗脱液用 1.5ml水稀释并混匀,最终体积为  3 ml;
过滤后上机测试
注:具体免疫亲和柱使用方法可参考说明书
3.   液相色谱-荧光测定
‹  仪器
液相色谱系统:
Agilent 1200二元高压泵
Agilent 1200真空脱气机
Agilent 1200  恒温自动进样器
Agilent 1200  柱温箱
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